要拍一整夜，先把对焦交给机器

一、焦面漂移是慢变量，最不容易察觉

开机时一切正常，几小时后图像一点点变软，回看才发现大半帧是虚的。温度变化、载物台机械回差、培养液蒸发、培养皿轻微变形，都会让焦面慢慢走。人一直盯着也拦不住，得靠硬件或软件把焦点锁住。

二、先让环境稳定下来

开始采集前让设备、载物台培养装置和样品在同一环境下充分平衡，别一装好就按开始。房间空调的开关、门的开合， overnight 里都是变量。能把设备放在少走动、温度稳定的位置，比后期算法补救省事。

三、自动对焦要选对方式

基于图像反差找焦点，和基于硬件参考面锁定焦点，适用的样品不一样：细胞稀疏、反差低的时候，前者容易找错。选型时用自己的典型样品试一次，比看功能列表可靠。

四、拍摄间隔和光剂量一起算

一整夜拍下来，帧数乘以每帧曝光，就是样品累计承受的光。间隔够用就好，不一定越密越好。荧光通道能省则省，形态变化用相差记录，往往就能回答主要问题。

五、存储和文件命名提前定

一晚上几百到几千帧，占的空间不小。确认硬盘余量、写入速度、断电之后能不能续上，再给文件定一套带日期和视野编号的命名规则。第二天打开目录能直接找到想要的序列，才算真的拍完。

六、务必先跑一晚短的预实验

用同样的设置跑三四个小时，检查焦面、状态、存储、命名四件事。预实验暴露的问题，改起来只要几分钟；正式跑完才发现，整夜的数据就得作废。