相差看片发灰，先查那个环对没对准

一、先判断是不是对中问题

正常的相差图像：背景均匀中灰，样品边缘有明亮或偏暗的晕环，细节有立体感。

如果整片发灰、一侧更亮、换倍率后反差突然变差，先别调样品，也别急着加曝光，先查光阑对中。

相差不是「加了一片滤光片」，而是聚光镜里的环形光阑与物镜里的相板必须同心成像。错开一点，反差就散掉了。

二、动手前确认三件事

1. 物镜带 Ph 标记

只有标 Ph 或 Phase 的物镜才有相板，普通明场物镜做不了相差。

2. 聚光镜有对应环位

转盘要切到与物镜倍率一致的 Ph 档，档位不匹配，环的大小对不上。

3. 照明已经居中

先把照明调到视场亮度均匀，再做相差对中。照明本身偏，后面怎么调都白费。

三、对中操作步骤

1. 从低倍相差物镜起步

用 10X Ph 开始，视场大、环容易找。

2. 先按明场把焦对实

放一片薄而干净的样品，先把样品像调清楚。

3. 插入对中望远镜

拔下目镜插入对中望远镜，或启用伯特兰透镜，调到能同时看见两个环：亮环是光阑像，暗环是物镜相板。

4. 调聚光镜对中螺丝

转动聚光镜两侧旋钮，把亮环移到与暗环完全重合。两环同心时，边缘均匀、没有一侧缺口。

5. 逐支物镜复核

换 20X、40X 时，各自对应的环位要重切、重看一次。不要以为低倍调好就全通用。

6. 换回目镜确认

视野应回到均匀中灰、细节立体；拍一张图留档，方便下次比对。

四、三种常见误判

1. 样品太厚

厚样品散射强，本身就会抬高背景，看上去像反差不足。先用薄片验证设备状态。

2. 培养皿底太厚

塑料底与盖玻片厚度不同，球差会让像发糊；用适合长工作距离的相差物镜更合适。

3. 用曝光去救

提高曝光只会把灰背景一起提亮，反差更差。相差的反差来自相位，不来自亮度。

五、日常维护

移动过显微镜、换过光源、清洁过聚光镜之后，都建议重新对中一次。把对中望远镜放在固定位置，别当附件收进库里。

六、结语

对中是相差观察里最容易被跳过的两分钟，也是反差问题里最常见的原因。按上面的顺序走一遍，能省掉大量反复制样和重拍的时间。