藻类镜检，多半卡在沉降那一步

一、藻类镜检难在样品，不在显微镜

第一次做水样，问题常常不是看不清，而是视野里几乎没有东西，或者一视野全是杂质。

藻类计数要做的事，是把一定体积水样里的细胞数换算成单位体积密度。体积、浓缩倍数、计数框面积，任何一个没记准，结果都不可用。先把这一步想明白，再谈倍率。

二、采样与固定

1. 取样要有代表性

表层、中层、岸边与中心差别很大；按监测方案定的点位和深度取，同时记录水温、天气和采样时间。

2. 固定要趁早

现场加固定液，尽快抑制藻细胞运动和降解。拖到回实验室再处理，鞭毛类容易变形或丢失。固定液种类与用量按本单位作业指导书执行。

3. 避光冷藏

固定后避光、低温保存，容器上写清点号与日期。

三、沉降浓缩

1. 先量准体积

取一定体积摇匀水样倒入沉降柱，体积要记进记录表，后面换算全靠它。

2. 静置时间要够

沉降时间按容器高度与藻体大小定，急不得；中途不要挪动、不要震动台面。

3. 虹吸别吸到底

用细管沿壁缓慢吸去上清，留底部少量浓缩液；吸得太狠会把沉下去的细胞一起带走。

4. 记下浓缩倍数

原体积与最终体积之比，是后面所有换算的基准。

四、制片与镜检

1. 摇匀再取样

浓缩液极易分层，吸取前轻轻摇匀，每次动作保持一致。

2. 计数框要注满

注入量与盖片方式按计数框说明做，避免气泡和溢液；气泡会让有效面积变小。

3. 先低倍扫片

10X 下先扫一遍，判断密度、杂质比例、有无成团藻类，再决定计数视野数量与是否需要稀释。

4. 换高倍定种

40X 辨种类、看细胞结构，必要时再用更高倍。密度过高就稀释重做，不要硬数。

5. 计数规则全组统一

压线细胞「计上不计下、计左不计右」这类边界规则，以及群体、丝状体的计数单位，都要事先约定并写进记录表。

五、记录与复核

至少留下：点位、时间、原水体积、浓缩后体积、计数框面积、计数视野数、各视野计数、换算结果、镜检人。

换算公式写进表格而不是心算；同一批样留一定比例做平行复核，偏差超出约定阈值就重做。

原始图像与原始记录分开归档，图片只作佐证，不替代表格。

六、什么时候上图像分析

样品量大、需要频繁出报告、又要保留可追溯图像时，图像采集与自动计数能明显省时间。但要用人工复核兜底：设备给的是候选结果，签字前仍要人眼确认种类与边界情况。

七、结语

藻类镜检的准确度，多半来自前处理和记录，少半来自镜下判断。把体积、浓缩倍数、计数规则固定下来，不同人、不同批次的结果才对得上。