相差环和荧光通道，别在同一块样品上硬凑

一、两种观察回答的是不同问题

相差或微分干涉用来看活细胞的轮廓、贴壁状态和运动，不需要标记；荧光用来确认某个标记在哪、强度怎么变。一个看整体状态，一个看特定信号，本来就该分开设计实验。

二、环和滤光块不是随手换一下就好

相差要物镜与环形光阑配对并做对中，荧光要激发、二向色镜、发射滤光片成套匹配。切换时还要重新考虑工作距离、光源强度和曝光。把这些当成一次完整的配置切换，而不是拨一下转盘。

三、同一样品上叠加，容易互相拖累

为了找荧光目标反复照射，活细胞状态先受影响；为了保形态把照明压得很低，荧光信号又不够。宁可分两批样品、分两次拍，再在时间轴上对齐，也别在一块样品上两头将就。

四、先定主次，再定顺序

如果这轮实验主要看形态，就用相差连续记录，荧光只在关键时间点补拍；如果主要看标记变化，就把环境控制和照明留给荧光，形态用少量明场或相差图做参照。顺序写进方案，现场不会来回改主意。

五、对中这件事值得每次确认

相差环没对准，整片发灰、边缘发虚，很多人第一反应是样品不行或相机不行。切回相差前花一分钟看一眼环的位置，往往就解决了。

六、把配置写进图注

哪只物镜、哪个环、哪套滤光块、什么曝光，写清楚。隔几周回头看图，或者换个人接着做，才不会把「配置不同」误读成「结果不同」。