荧光显微镜技术参数

一、光学系统

• 无限远色差校正光学系统，落射荧光与透射明场共用同一物镜

• 物镜齐焦距离 45 mm

• 荧光光路与明场光路切换为转盘或推拉式，切换后无需重新对焦

• 光路内做杂散光抑制，背景暗、信噪比高

二、荧光光路与通道（核心项）

• 每个荧光通道由激发滤光片、二向色镜、发射滤光片三件构成

• 蓝色通道 B（激发 460–495 nm / 发射 510–550 nm），适配 FITC、GFP、Calcein

• 绿色通道 G（激发 510–560 nm / 发射 575–625 nm），适配 TRITC、Rhodamine、DsRed

• 紫外通道 U（激发 340–390 nm / 发射 420–460 nm），适配 DAPI、Hoechst

• 通道数量与组合按标记需求选配，常见 2 通道、3 通道、4 通道

• 多通道转盘切换时间 ≤ 1 s，支持多色连续拍摄

三、物镜

• 荧光专用平场消色差或半复消色差物镜：4X / 10X / 20X / 40X / 100X（油）

• 数值孔径参考值：10X ≥ 0.30，20X ≥ 0.50，40X ≥ 0.75，100X ≥ 1.30

• 高数值孔径物镜收集荧光效率更高，弱信号样品差别明显

• 物镜需匹配盖玻片厚度 0.17 mm，油镜需配荧光专用镜油

四、光源

• LED 光源：可按通道独立开关、亮度可调，免预热、寿命 ≥ 20000 h

• 汞灯 100 W：特定谱线亮度高，但需预热、寿命短、含汞

• 光源稳定性直接影响定量荧光结果，长时间成像建议选 LED

• 部分机型支持光强分级（25% / 50% / 100%），减少荧光淬灭

五、观察头与目镜

• 三目观察头，30° 倾斜，可接相机

• 分光比常见 100:0 / 20:80，荧光拍摄建议 0:100 全通相机

• 10X 宽视野目镜，视场数 ≥ 20 mm

• 目镜端配荧光防护滤片（选配），保护观察者眼睛

六、载物台与调焦

• 机械移动载物台，行程 ≥ 75 × 50 mm

• 粗微动同轴调焦，微动精度 ≤ 0.002 mm

• 长时间活细胞成像建议加装恒温台与 CO₂ 培养装置

• 载物台可加装多孔板适配器

七、数码成像（灵敏度是关键）

• 荧光成像优先看量子效率与噪声，而不是像素数

• 建议相机靶面 ≥ 2/3″，像素 500 万–1200 万，单片像素尺寸不小于 3 μm

• 弱信号场景可选制冷相机（半导体制冷至 −10 ℃），降低暗电流

• 曝光时间、增益、binning 可调，支持多通道叠加与通道伪彩

八、使用环境

• 电源 AC 220 V ± 10%，50 Hz

• 建议在暗室或弱光环境使用，环境光会抬高背景

• 工作温度 5–40 ℃，相对湿度 ≤ 80%

• 样品避光保存，减少标记提前衰减

九、采购时最容易出问题的三处

• 只写"荧光显微镜"不写通道，到货只有一个 B 通道，双标实验做不了

• 通道之间串色未做评估，多色实验互相渗漏，数据不可用

• 相机标称像素高但靶面小、无制冷，弱荧光下噪点盖过信号