显微镜下怎么认出细胞污染：细菌、真菌、支原体的不同面孔

细胞房的早晨，打开培养瓶放到显微镜下一看：多了些小点，有的还在动。这时候最忌讳的是"看着像就扔"，或者"看着不像就继续用"。污染分好几种，镜下表现完全不同，处理方式差别也很大。

一、先分清污染和状态差

细胞长得慢、形态变圆、贴壁不牢，不一定是污染。血清批次换了、胰酶消化过头、培养基过期、CO2 浓度不对，也会出现同样的情况。判断的第一步是看培养基：清亮还是浑浊。清亮而细胞状态差，先查培养条件；浑浊或者颜色异常变化，才往污染上想。

二、细菌污染：最快、最明确

细菌的特点是快。接种后几小时内，培养基就会明显浑浊，酚红指示剂从橙红变成黄（产酸）或者紫红（产碱）。镜下看，背景里满视野都是 1 微米左右的细小颗粒，多数在做不规则的布朗运动，也有能自主游动的。

关键鉴别点：细菌会布满整个视野的液体层，而不只是贴着细胞。调焦上下走一遍，如果在细胞之外的液体里也全是小点，基本可以确认。革兰染色能进一步区分，也方便判断来源。

处理没有余地：连同培养瓶一起密封丢弃，不要试图用抗生素救。抗生素在细胞培养里只能掩盖，会让污染扩散到整个培养箱。

三、真菌和酵母：两种完全不同的东西

真菌污染最典型的特征是菌丝，镜下能看到细长的丝状结构，往往从一个点向外辐射生长，长得慢但一旦成形就很难清掉。孢子是圆形或椭圆形的小体，比细菌大，约 3 到 5 微米，常成串出现。

酵母污染不同，它是单细胞，镜下是一颗颗圆润的小球，能看到出芽的形态，像一串小葡萄。它比细菌大、比细胞小，运动不明显，培养基也会变浑浊但速度慢一些。

这两类都要整批丢弃，同时彻底清理培养箱：水盘换水、内壁紫外照射、必要时用过氧化氢或专用消毒剂擦拭。孢子能长期存活，只丢培养瓶往往几天后又出现。

四、支原体：看不见的那种

支原体是细胞培养里最麻烦的污染，因为没有细胞壁，直径只有 0.2 到 0.3 微米，普通光学显微镜根本看不到。培养基不浑浊、颜色正常，唯一的迹象是细胞长得慢了、状态变差、转染效率下降、染色体异常率升高。

确认只能靠专门方法：PCR 检测最常用，也可以做 Hoechst 33258 荧光染色，在荧光显微镜下看细胞表面和周围有没有细小的荧光点。定期检测比事后确认更有价值，规范的细胞房通常每季度做一次支原体筛查。

已经确认污染的细胞，原则上整批清除。因为支原体不会自己消失，还可能通过气溶胶扩散，影响同培养箱里的其他细胞。

五、这些"脏东西"其实不用紧张

细胞碎片：传代时没吹散、消化过度、冻存复苏后死细胞多，镜下有大量不规则的小块，边缘模糊，不运动。换液或下一次传代后会减少。

血清沉淀：血清里的脂蛋白、纤维蛋白在灭活或冻融后析出，呈细小颗粒，分布均匀，不随细胞走，换液后仍然有。这是正常现象，买质量稳定批次的血清即可。

培养瓶表面的划痕或塑料反光：调焦时像满视野的小点，但一转焦距就消失了。

判断的简单办法是看它会不会随换液消失、会不会随传代减少。会，就不是污染。

六、还有两种容易忽略的

交叉污染：两株细胞混在一起，镜下看形态不一致，长得快的那株会逐渐压过另一株。这种事不靠显微镜发现，靠 STR 鉴定，国际期刊现在普遍要求提供细胞系鉴定证明。

原虫污染：少见但偶有发生，镜下是明显比细胞小、比细菌大、能快速穿梭游动的东西。水源和操作污染是主要来源。

七、一个可执行的排查顺序

看到异常，按这个顺序走：先看培养基清浊和颜色，再调焦到细胞之外看液体层，然后传代观察是否能消失，最后做革兰染色和支原体 PCR。不要跳步骤，也不要凭感觉倒掉一整批珍贵的细胞。